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3CR Bioscience 致力於開發創新且卓越的基因檢測技術和產品，其 PACE® (PCR Allele Competitive Extension) 專利技術即是由 KASP™ 技術開發團隊設計研發的新一代等位基因專一性 PCR (allele-specific PCR) 基因分型技術，其特點是非專一性擴增極低，且具備更廣泛的應用彈性，包括優異的粗萃 DNA (crude DNA) 樣本適應能力、支援多重基因型分析 (multiplex genotyping)，以及可直接由 RNA 進行一步驟基因分型 (one-step RNA genotyping) 等。

PACE® 試劑不僅具有領先業界的效能與具競爭力的價格，並且完全相容於既有的 KASP™ 系統與引子，可協助研究人員以精準、高效且更具成本效益的方式完成單一核苷酸多型性 (single nucleotide polymorphism, SNP) 與插入缺失變異 (insertion-deletion, Indel) 的大規模篩檢，廣泛應用於分子標誌輔助選育 (marker-assisted selection, MAS)、作物改良、育種、遺傳學研究及生物資源管理等領域。

目前全球已有超過 600 家機構採用 PACE® 技術，包含 Sakata Seed Corporation、LongPing High-Tech、Deutsche Saatveredelung (DSV)、Hy-Line、CoverCress、Genetika Science、ICAR-IIHR、Julius Kühn-Institut、Namdhari Seeds、North Carolina State University、Ramiro Arnedo Semillas、Semillas Fitó、Starke Ayres、Université de Picardie Jules Verne、Vizgenetics SLU 等國際知名業者及學術單位。

若您有興趣進一步了解如何將 PACE® 技術運用在您的研究專案中，歡迎與我們聯繫。我們將依照您的研究需求與設備資源，提供最適合的產品建議與最新活動訊息。

PACE® 技術原理

PACE® 技術原理與 KASP™ 相似，是利用兩條競爭性等位基因專一性引子 (competing allele-specific primers) 與通用螢光報導系統來區分不同的基因型。一個標準的 PACE® 反應主要由 DNA 樣本、Assay Mix（引子組）與 Master Mix（預混液）三個部分組成，其中：

引子組 (Assay Mix)：包含三種未標記的 primers，分別是兩種等位基因專一性前置引子 (allele-specific forward primers)，用於辨識目標變異位點。兩者序列僅在 3' 末端鹼基不同（對應兩種不同的等位基因），且各自帶有一段與 FAM 或 HEX 螢光報導探針互補的 5' 端尾巴序列 (tail sequence)；一種共同反置引子 (common reverse primer)，結合於目標序列的反股上。

預混液 (Master Mix)：包含 PCR 擴增所需的基本元件，以及通用的 FRET 螢光報導匣 (universal FRET cassettes)。報導匣含有兩種 FRET 螢光探針，分別帶有 FAM 和 HEX 螢光染料；在未與互補序列結合的狀態下，螢光訊號會被探針結構上的淬滅劑 (quencher) 所抑制。與目標序列完全匹配的等位基因專一性引子，在 PCR 反應中具有較高的延伸效率，因此於擴增過程中逐漸取得競爭優勢。隨著 PCR 進行，專一性引子的 5' 尾巴會被整合到新合成的 DNA 股中。預混液中的螢光報導匣會與剛剛產生的尾巴互補序列結合，隨著新的延伸反應，螢光染料會與淬滅劑分離，釋放出螢光訊號。藉由判讀螢光訊號，即可獲知樣本的變異位點是屬於同型合子 (homozygous) 還是異型合子 (heterozygous)。

A typical genotyping cluster plot from a 384-well fluorescent plate read following a SNP genotyping reaction with PACE Genotyping Master Mix. A red signal is generated from homozygous HEX samples; a blue signal is generated from homozygous FAM samples; a green signal is generated from HEX/FAM heterozygous samples. Black samples at the origin are the no-template controls (NTCs).

More than 600+ Universities and Businesses trust in 3CR Bioscience.

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