DiO 長鏈碳花青螢光染劑
DiO (DiOC18(3))
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產品簡介
DiO (DiOC18(3)) 是一種廣泛應用於細胞膜標記的綠色螢光探針，屬於碳花青染料 ( carbocyanine dyes)。其分子式為 C53H85ClN2O6、分子量 881.7、CAS 編號 34215-57-1。作為一種強大的親脂性 (lipophilic) 追蹤染劑，DiO 進入細胞膜後會透過橫向擴散 (lateral diffusion) 逐漸使整個細胞膜發出螢光。DiO 在水溶液中幾乎不發光，但當其嵌入脂質雙層膜後，螢光強度會劇烈增強，並具備極高的消光係數 (extinction coefficient) 與極佳的光穩定性 (photostability)。DiO 發出的綠色螢光可經由標準的 FITC 濾片偵測 (Ex/Em (MeOH) = 484/501 nm)，建議搭配螢光顯微鏡或流式細胞儀 (flow cytometer) 進行分析。
主要特色
- 高專一性：極佳的親脂性，能精確且穩定地嵌入脂質雙層。
- 明亮穩定：具備極高的消光係數與極短的激發態壽命 (~1 奈秒 (nanosecond, ns))，能表現出高螢光和高光穩定性，訊號穩定且可靠。
- 長效追蹤：適用於活細胞與固定組織的長期追蹤，且不影響細胞生理活性。
實驗應用
由於 DiO (DiOC18(3)) 對細胞活力 (cell viability) 影響極小，且具備長效追蹤的特性，因此被廣泛應用於神經科學、發育生物學及細胞生物學研究，例如：
- 細胞追蹤與遷移：用於活體或固定組織中的順向/逆向神經追蹤、發育過程或移植後的細胞遷移觀測。
- 細胞生理研究：檢測細胞融合 (cell fusion)、細胞黏附 (cell adhesion) 以及細胞毒性分析 (cytotoxicity)。
- 脂質動力學：結合 FRAP 螢光漂白後恢復技術偵測脂質在細胞膜上的擴散速率。
- 特殊標記：亦可用於脂蛋白 (lipoproteins) 的標記。
操作注意事項
- 固定與打洞處理：標定後的細胞可使用 4% 多聚甲醛 (paraformaldehyde) 固定，應避免使用甲醇 (methanol) 等有機溶劑，亦不建議在染色後進行打洞程序 (permeabilization)，以防染劑流失。若實驗必須進行打洞，DiO 亦可相容於在 0.1% Triton X-100 室溫固定與打洞後進行染色標記。
- 標定表現：DiO 的染色強度通常較其紅色同類染劑 DiI 弱，且在某些固定組織中螢光可能完全消失。
- 溶解性：可溶於乙醇 (ethanol)、無水 DMSO (anhydrous DMSO) 及無水 DMF (anhydrous DMF)。在無水 DMSO 中的溶解度約為 10 mg/mL。若溶解困難，可適度加熱或以超音波處理。
- 用量與包裝：根據工作濃度 10 μM、每個反應用量 100 μL 計算，10 mg 包裝約可供應 11,341 次實驗。
儲存條件
在 4℃ 可穩定保存 12 個月。避光保存。