Hoechst 33342 染劑
Hoechst 33342
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產品簡介
Hoechst 33342（又稱為 bis-Benzimide H 33342 或 HOE 33342）是一種廣泛應用於活細胞 DNA 染色的藍色螢光染劑，常用於細胞核染色 (nuclear staining)、細胞凋亡檢測 (apoptosis) 和細胞週期分析 (cell cycle)。其分子式為 C27H28N6O•3HCl•3H2O、分子量 616.0、CAS 編號 881691-13-0。Hoechst 33342 屬於非嵌入性 DNA 螢光探針染劑，能專一性地結合在雙股 DNA 的小溝區 (minor groove)，特別是 AT 序列富集處。在溶液中，Hoechst 33342 僅能發出微弱螢光，一旦與 DNA 結合後，螢光強度會顯著增強，發出明亮且穩定的藍色螢光（Ex/Em (bound DNA) = 346/460 nm）。與 DAPI 相比，Hoechst 33342 具有更高的細胞膜穿透性，因此被視為是活細胞細胞核染色的最佳選擇之一。 ※DAPI 通常應用於固定細胞的細胞核染色，詳細產品說明可參見「DAPI 細胞核染劑(粉狀) (BMD0063)」。
實驗應用
Hoechst 33342 對活細胞毒性極低，結合後螢光訊號可穩定持續數日甚至更久；且其背景染色極低，染色後通常不需經過洗滌步驟 (wash) 即可觀察。其常見應用包含：
- 細胞凋亡與細胞週期：作為 DNA 探針，觀察凋亡細胞的核濃縮或核碎裂現象；或搭配 BrdU 使用，進行細胞週期分析。
- 對比染色 (counterstain)：常用作多重螢光染色中的細胞核對照標定。
設備相容性
適用於螢光顯微鏡影像觀察與攝影，或使用流式細胞儀 (flow cytometer) 進行細胞群體的訊號分析。
實驗注意事項
- 濃度優化：可根據實驗需求，在 0.5–10 μg/mL 的工作濃度範圍內進行優化。
- 反應用量：以 96 孔盤貼附型細胞 (adherent cells) 實驗為例，建議每孔加入 100 μL 濃度為 5 µg/mL 的染色液。10 mg Hoechst 33342 染劑約可供應 20,000 個孔位使用。懸浮型細胞 (suspension cells) 則建議加入至少三倍於樣本體積的染色液並充分混勻，以確保染色效果。
- 相關染料比較：Hoechst 33342 在水中的溶解度略低於 Hoechst 33258，但兩者均具有卓越的細胞膜穿透能力，皆適用於活細胞染色與凋亡偵測。DAPI 和 PI (Propidium Iodide) 雖同樣可適用於細胞核染色，但 DAPI 通常應用於固定細胞，而 PI 則是僅有細胞膜受損的死細胞才能染上。
儲存條件
在 -20℃ 可穩定保存至少 12 個月。避光保存。