mPTP 粒線體通透性轉換孔測定試劑盒

粒線體通透性轉換孔 (mitochondrial permeability transition pore, mPTP)，又稱為巨型通道 (megachannel)，是存在於粒線體內外膜之間，由多種蛋白質複合體組成的非選擇性高導電率通道。在正常生理狀態下，粒線體內膜能維持穩定的膜電位梯度，以確保細胞呼吸和能量供應。隨著 Ca²⁺ 的攝取和釋放，低導電率的 mPTP 會在開放和關閉之間交替變化。

然而，在細胞凋亡和病理性死亡過程中， Ca²⁺ 過載 (Ca²⁺ overload)、粒線體穀胱甘肽氧化 (mitochondrial glutathione oxidation)、活性氧物質 (reactive oxygen species, ROS) 增加以及細胞色素 C 的釋放 (cytochrome C release)，皆會導致 mPTP 的持續性開啟，引發粒線體膜電位下降及粒線體成分釋放，進而加速細胞死亡程序。

Abbkine mPTP 粒線體通透性轉換孔測定試劑盒 (KTA4002) 提供了一種比偵測粒線體膜電位變化更為直接的 mPTP 開放檢測方法。其偵測原理是基於 Calcein AM 染色與氯化鈷 (CoCl₂) 螢光淬滅技術：

• Calcein AM 螢光標定：首先利用 Calcein AM 標定活細胞。Calcein AM 能輕易穿透細胞膜進入細胞，被細胞內的酯酶 (esterase) 水解為具極性且無法穿透膜的 Calcein。被截留在細胞內的 Calcein 可發出綠色螢光 (Ex/Em = 494/517 nm)，訊號涵蓋細胞質與粒線體區域。
• 螢光淬滅 (fluorescence quenching)：加入 CoCl₂ 後，位於細胞質中的螢光會被 Co²⁺ 淬滅，僅留下粒線體內的螢光。
• mPTP 結果判定：當 mPTP 開啟時，粒線體內的 Calcein 會釋放至細胞質並被 Co²⁺ 淬滅，導致粒線體螢光顯著減弱或消失。

本試劑盒安全性高，對細胞幾乎無毒性，相容於流式細胞儀 (flow cytometer) 與螢光顯微鏡檢測。試劑盒內附「離子黴素 (Ionomycin)」，可用來處理細胞作為陽性對照組，透過促進細胞加載更多的 Ca²⁺ 使 mPTP 活化，進而觀察粒線體螢光的淬滅現象。