LinKine™ FITC 抗體標定試劑盒
LinKine™ FITC Labeling Kit
廠牌
產品簡介
LinKine™ FITC 抗體標定試劑盒提供了一種簡便快速的方法，可將 FITC 螢光染料 (fluorescein isothiocyanate, FITC) 標定至抗體、蛋白質、胜肽 (peptide) 或其他含有游離胺基 (free amine groups) 的分子上，標定產物可適用於免疫偵測實驗。套組內含已活化的 FITC 溶液，可直接用於標定反應；套組亦附有純化管柱，標定完成後可直接進行純化，去除未反應的游離染料，減低背景干擾。使用本產品製備 FITC 螢光標定一級抗體，即可省去二級抗體使用步驟，不僅縮短實驗時程，也能避免因二抗非專一性結合所導致的高背景值問題，特別適合多重螢光染色實驗使用。
主要特色
- 套組內附已活化的 FITC 溶液，可直接與抗體或蛋白質上的游離胺基反應形成標定產物，無需自行活化染料。
- 套組內含純化管柱 (0.5 mL, 50 KD)，標定完成後可直接進行離心純化，快速去除未反應的游離 FITC，提高標定產物純度，避免免疫偵測反應背景值升高。
- FITC 激發光/放射光波長峰值約為 Ex/Em = 492/520 nm，呈綠色螢光，可搭配常見流式細胞儀與螢光顯微鏡之 FITC 濾光片組合使用。
實驗注意事項
- 進行標定反應前，樣本初始濃度建議高於 2 mg/mL，理想濃度為 2.5 mg/mL 以上；若濃度不足，建議先進行濃縮處理。
- 樣本緩衝液 pH 值須介於 6.5–8.0 之間，可使用 MES、PBS 或 HEPES 等不含游離胺基的緩衝液；EDTA 等螯合劑不會影響，可正常使用；甘油 (glycerol) 濃度須低於 50%，BSA 濃度須低於 0.1%。緩衝液中不可含有 Glycine 及其他具游離胺基的成分，以免干擾標定反應。若樣本緩衝液含有可能干擾標定的成分，建議先以超過濾離心濃縮管或透析袋將緩衝液置換為 PBS，再進行後續標定步驟。更多樣本緩衝液細部條件說明，可參照下方表格或產品說明書。
- 本套組所附純化管柱適用於分子量 100–200 kDa 的樣本，若樣本分子量超出此範圍，建議選用其他規格的純化管柱。
- 標定完成的產物於 4°C 避光保存可穩定 1 個月以上；若需長期保存，建議以等體積甘油 (glycerol) 作為冷凍保護劑，分裝後存放於 -20°C 避光保存，並避免反覆凍融。
- 不同批號或不同廠牌的套組組件不建議混用，以免影響標定結果的穩定性。
| pH | 6.5-8.0 |
| Amine free buffer | MES, PBS, HEPES |
| Chelating agents (e. g. EDTA) | ✓ |
| Glycerol | < 50% |
| BSA | < 0.1% |
| Glycine | ✗ |
| Components containing amino | ✗ |
科學背景
FITC (fluorescein isothiocyanate) 是螢光素 (fluorescein) 的衍生物，其結構是在螢光素底環上以異硫氰酸酯基 (-N=C=S) 取代一個氫原子而成，此官能基對抗體或蛋白質上的親核性基團（包括胺基與硫氫基）具高度反應性，可與樣本上的游離胺基形成穩定的共價鍵結。FITC 是目前製備綠色螢光標定產物時最常用的螢光染料之一，廣泛應用於流式細胞分析 (flow cytometry)、免疫螢光染色 (immunofluorescence) 與免疫組織化學染色等實驗。需特別注意的是，FITC 的螢光強度對環境 pH 值較為敏感，在酸性條件下螢光訊號強度會明顯下降，使用時應留意樣本所處的 pH 環境是否可能影響訊號判讀。此外，FITC 亦相對容易發生光漂白 (photobleaching) 現象，因此標定產物建議避光保存，並儘量縮短螢光顯微鏡下的曝光時間，以維持訊號穩定性。
套組內容物
| Kit components | Size | Storage conditions | |
| 3×100 μg | 1 mg | ||
| Activated FITC Solution | 7.5 µL | 25 µL | -20℃, protected from light |
| FITC Labeling Solution | 15 μL | 50 μL | -20℃ |
| Purification Column (0.5 mL, 50 KD) | 3 | 2 | RT |
| Booklet | 1 | 1 | RT |
儲存條件
在建議儲存條件下可穩定保存 6 個月。