LinKine™ AP 抗體標定試劑盒
LinKine™ AP Labeling Kit
廠牌
產品簡介
LinKine™ AP 抗體標定試劑盒提供了一種簡單便利的方法，可將 AP 酵素（alkaline phosphatase，又稱為鹼性磷酸酶）標定至抗體、蛋白質、胜肽 (peptide) 或其他含有游離胺基 (free amine groups) 的分子上，標定產物可適用於免疫偵測實驗。套組採用戊二醛 (glutaraldehyde) 作為交聯劑，將 AP 酵素與樣本上的游離胺基進行共價鍵結，形成穩定的標定產物。使用本產品製備標定一級抗體，即可省去二級抗體使用步驟，不僅縮短實驗時程，也能避免因二抗非專一性結合所導致的高背景值問題，特別適合多重染色實驗使用。
主要特色
- 套組採用戊二醛作為交聯劑，可將 AP 酵素與抗體或蛋白質上的游離胺基進行共價鍵結，形成穩定的標定產物。
- 每 1 mg AP 酵素可與 0.5–1 mg 抗體進行標定反應，可自行調整抗體與 AP 酵素之間的莫耳比 (molar ratio)、反應緩衝液種類與 pH 值等參數，以適應不同目標分子特性，或因應實驗需求。
實驗注意事項
- 進行標定反應前，樣本（例如抗體）建議應經過純化，溶於 MES、TBS 或 HEPES 緩衝液中（pH 6.5–8.0），濃度達 1 mg/mL 以上。特別注意不可使用含磷酸鹽成分的緩衝液（如 PBS），因較高濃度的無機磷酸根離子會競爭性抑制 AP 酵素活性，導致偵測時產生高背景值，建議改用 TBS 等不含磷酸鹽的緩衝系統。亦應避免緩衝液中含有具游離胺基的成分（如 Tris、Glycine），以免干擾標定反應；EDTA 等螯合劑則不會影響，可正常使用。更多樣本緩衝液細部條件說明，可參照下方表格或產品說明書。
- 標定完成的產物可於 4°C 穩定保存 1 個月以上；若需長期保存，建議加入等體積甘油作為冷凍保護劑，並存放於 -20°C。若需稀釋標定產物，也應避免使用含磷酸鹽成分的緩衝液（如 PBS）。
- 不同批號或不同廠牌的套組組件不建議混用，以免影響標定結果的穩定性。
| pH | 6.5-8.0 |
| Amine Free Buffer | MES, TBS, HEPES |
| Chelating Agents (e. g. EDTA) | ✓ |
| Glycerol | < 50% |
| BSA | < 0.1% |
| Glycine | ✗ |
| Gelatin | < 0.1% |
| Proclin | ✗ |
| Phosphate Buffer | ✗ |
| Components Containing Amino | ✗ |
科學背景
鹼性磷酸酶（AP 酵素）是一群可將受質分子上的磷酸單酯水解、移除磷酸根的酵素統稱，此過程稱為去磷酸化 (dephosphorylation)。AP 酵素與適當受質反應後，可產生呈色、螢光或冷光訊號產物，是 ELISA、Western Blot 與免疫組織化學染色等免疫分析實驗常用的報導酵素 (reporter enzyme)。LinKine™ AP 抗體標定試劑盒採用戊二醛作為雙官能基交聯劑 (bifunctional cross-linking agent)，戊二醛分子兩端各具有一個醛基，可分別與 AP 酵素及抗體（或其他待標定分子）上的游離胺基（主要為離胺酸殘基）反應，將兩者以共價鍵結合。
套組內容物
| Kit components | Size | Storage conditions | |
| 3×100 μg | 1 mg | ||
| AP Solution | 30 µL | 100 µL | 4℃, protected from light |
| AP Labeling Solution | 10 mL | 10 mL | 4℃ |
| Cross-linking Agent | 500 µL | 500 µL | 4℃, protected from light |
| AP Quencher Powder | 3 | 1 | 4℃, protected from light |
| Booklet | 1 | 1 | RT |
儲存條件
在建議儲存條件下可穩定保存 6 個月。