LinKine™ HRP 抗體標定試劑盒
LinKine™ HRP Labeling Kit
廠牌
產品簡介
LinKine™ HRP 抗體標定試劑盒提供了一種簡便快速的方法，可將HRP 酵素（horseradish peroxidase，又稱為辣根過氧化物酶）標定至抗體、蛋白質、胜肽 (peptide) 或其他含有游離胺基 (free amine groups) 的分子上，標定產物可適用於免疫偵測實驗。套組所提供的 HRP 酵素已預先經過活化處理，可直接用於標定反應，省去自行製備與驗證活化酵素的步驟。使用本產品製備標定一級抗體，即可省去二級抗體使用步驟，不僅縮短實驗時程，也能避免因二抗非專一性結合所導致的高背景值問題。直接標定型一級抗體特別適合多重染色實驗使用。
主要特色
- 套組內附預先活化的 HRP 酵素，經過過碘酸鹽氧化處理，具備醛基官能基，可直接與抗體或蛋白質上的游離胺基（主要包括離胺酸 (lysine) 側鏈及蛋白質 N 端的胺基）反應形成共價鍵結。
- 套組所附 HRP 酵素活性高（120–200 units/mg）且性質穩定，於 -20°C 可穩定保存至少 12 個月。
- 每 1 mg 活化 HRP 酵素可與 1 mg IgG 進行標定反應，可依實驗需求選擇不同包裝規格（3×100 μg、1 mg）。
- 可自行調整抗體與活化 HRP 酵素之間的莫耳比 (molar ratio)、反應緩衝液種類與 pH 值等參數，以適應不同目標分子特性，或因應實驗需求。
實驗注意事項
- 進行標定反應前，樣本（例如抗體）建議應經過純化，溶於 MES、PBS 或 HEPES 緩衝液中（10–50 mM，pH 6.5–8.0），濃度達 1 mg/mL 以上。 緩衝液中不可含有具游離胺基的成分（如 Tris、Glycine），亦應避免疊氮化鈉 (Sodium Azide) 及 Proclin 等防腐劑，以免干擾標定反應或破壞 HRP 酵素活性；EDTA 等螯合劑則不會影響，可正常使用。更多樣本緩衝液細部條件說明，可參照下方表格或產品說明書。
- 標定完成的產物可於 4°C 穩定保存 1 個月以上；若需長期保存，建議加入 50% 甘油 (glycerol) 作為冷凍保護劑，並存放於 -20°C。
- 不同批號或不同廠牌的套組組件不建議混用，以免影響標定結果的穩定性。
| pH | 6.5-8.0 |
| Amine free buffer | MES, PBS, HEPES |
| Chelating agents (e. g. EDTA) | ✓ |
| Glycerol | < 50% |
| Sodium Azide | ✗ |
| BSA | < 0.1% |
| Glycine | ✗ |
| Gelatin | < 0.1% |
| Proclin | ✗ |
| Borate buffer | ✓ |
| Components containing amino | ✗ |
科學背景
辣根過氧化物酶（HRP 酵素）是一種醣蛋白，分子量約 44 kDa，可與受質反應產生呈色、螢光或化學冷光訊號產物。因其單體結構穩定、易於產生顯色反應，因此被廣泛應用於 ELISA、Western Blot、IHC、ICC/IF 實驗中，作為報導酵素 (reporter enzyme)。現行 HRP 抗體標定試劑多沿用過碘酸鹽氧化法 (periodate oxidation method) 的原理，此方法最早由 Nakane 與 Kawaoi 於 1974 年提出：以溫和的過碘酸鈉 (sodium periodate) 氧化辣根過氧化物酶表面的醣鏈，形成具反應性的醛基，此醛基可自發性且高效率地與抗體或其他蛋白質上的游離胺基反應形成共價鍵結，產生穩定的接合物。相較於戊二醛交聯法 (glutaraldehyde coupling) 等傳統胺基反應化學方法，此方式較不易引發蛋白質聚合 (polymerization) 或造成鍵結分子失活，因此成為目前 HRP 酵素抗體標定領域中最普遍採用的標準方法之一。
套組內容物
| Kit components | Size | Storage conditions | |
| 3×100 μg | 1 mg | ||
| Activated HRP solution | 22.5 µL | 75 µL | 4℃, protected from light |
| HRP labeling solution | 30 µL | 100 µL | 4℃ |
| HRP quencher powder | 3 | 1 | 4℃, protected from light |
| Booklet | 1 | 1 | RT |
儲存條件
在建議儲存條件下可穩定保存 6 個月。