EliKine™ 人類 TNF-α ELISA 試劑盒
EliKine™ Human TNF-α ELISA Kit
廠牌
產品簡介
EliKine™ 人類腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor-alpha, TNF-α) ELISA 試劑盒採用三明治型酵素免疫分析法 (Sandwich ELISA)，可定量分析血清、血漿及細胞培養上清液樣本中的人類 TNF-α 濃度。檢測時，將標準品或樣本加入試劑盒提供的微量盤中，盤孔底部已預先包被 TNF-α 專一性捕捉抗體。樣本中的 TNF-α 與捕捉抗體結合後，再加入生物素 (Biotin) 標記之 TNF-α 專一性偵測抗體，形成抗體－抗原－抗體三明治複合體。沖洗去除未結合物質後，加入鏈黴親和素－辣根過氧化物酶複合物 (Streptavidin-HRP conjugate)，使 HRP 與生物素標記偵測抗體結合。再次沖洗後加入 TMB 受質溶液進行呈色反應，最後加入終止液 (stop solution) 停止反應，並於 450 nm 測定吸光值。在檢測範圍內，450 nm 吸光值與樣本中的 TNF-α 濃度呈正比，可透過標準曲線定量分析 TNF-α 濃度。
產品規格
- 適用樣本 (sample type)：血清、血漿、細胞培養上清液
- 偵測範圍 (detection range)：7.8–500 pg/mL
- 靈敏度 (sensitivity)：4 pg/mL
- 分析內精密度 (intra-assay precision)：CV (%) <10%
- 分析間精密度 (inter-assay precision)：CV (%) <12%
- 檢測時間 (assay duration)：3–5 小時
- 檢測方法 (detection method)：比色法 (colorimetric)
- 分析類型 (assay type)：三明治 ELISA (Sandwich ELISA)
檢測原理
三明治 ELISA (Sandwich ELISA) 是檢測蛋白質、生長因子及細胞激素等生物分子的常用免疫分析技術，具有高專一性與高靈敏度。該方法採用兩株辨識不同抗原表位的專一性抗體，分別作為捕捉抗體與偵測抗體。當樣本中含有分析物時，可形成「捕捉抗體－分析物－偵測抗體」三明治複合體；透過生物素－鏈黴親和素系統 (Biotin-Streptavidin system) 連結 HRP 酵素標記物，加入酵素受質後產生顯色反應，其顏色深淺與樣本中的分析物濃度呈正比，並可透過標準曲線進行定量分析。
科學背景
腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor-alpha, TNF-α) 是一種重要的促發炎細胞激素 (proinflammatory cytokine)，為第二型跨膜蛋白 (type II transmembrane protein)。TNF-α 可經由腫瘤壞死因子轉換酶 (TNF-α-converting enzyme, TACE) 切割其跨膜前驅蛋白的細胞外區域，形成具有生物活性的可溶性 TNF-α (soluble TNF-α, sTNF-α)，並釋放至細胞外。TNF-α 與 TNF 受體 (TNF receptor, TNFR) 結合後，可啟動下游訊號傳遞，參與發炎反應、免疫細胞活化、細胞存活及細胞死亡等多種生物過程。TNF-α 可由單核球 (monocytes)、巨噬細胞 (macrophages)、T 細胞及其他免疫細胞產生，其調控異常與慢性發炎及自體免疫反應相關。TNF-α 檢測廣泛應用於發炎反應、免疫調節、細胞死亡及自體免疫相關研究。
套組內容物
| Kit components | Size | Storage conditions | |
| 48 T | 96 T | ||
| Human TNF-α Microplate | 48 wells | 96 wells | 4℃ |
| Human TNF-α Standard (lyophilized) | 1 | 2 | 4℃ |
| Sample Diluent (5×) | 3.5 mL | 7 mL | 4℃ |
| Assay Buffer (5×) | 3.5 mL | 7 mL | 4℃ |
| Human TNF-α Detect Antibody (100×) | 60 μL | 120 μL | 4℃ |
| Streptavidin-HRP (100×) | 60 μL | 120 μL | 4℃ |
| HRP Substrate (TMB) | 5 mL | 10 mL | 4℃, protected from light |
| Stop Solution | 5 mL | 10 mL | 4℃ |
| Wash Buffer (20×) | 25 mL | 50 mL | 4℃ |
| Plate Covers | 1 | 2 | RT |
儲存條件
在建議儲存條件下可穩定保存 12 個月。