CheKine™ 輔酶 Ⅰ NAD(H) 檢測試劑盒
CheKine™ Micro Coenzyme Ⅰ NAD(H) Assay Kit
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產品簡介
本試劑盒提供了一種簡便且靈敏的方法，用於偵測多種生物樣本中的 NAD+ 與 NADH 濃度及其比值。本試劑盒採用的是酵素循環反應 (enzyme cycling reaction)，這種方法能大幅提升偵測靈敏度，且能專一性辨識 NAD+/NADH，不會與 NADP+/NADPH 產生交叉反應。其偵測原理是利用特定酵素先將樣本中的 NAD+ 還原為 NADH，隨後 NADH 在中間電子載體（通常為 1-methoxy PMS）的幫助下，將電子傳遞給 WST-8，使其還原為橙黃色甲臢染料 (formazan dye)。透過偵測 450 nm 吸光值的變化，即可評估樣本中的 NAD+/NADH 含量，其顯色強度與 NAD+/NADH 濃度成正比。
主要特色
- 適用於測定動物組織、植物組織、細胞、細菌、血清 (serum) 及血漿 (plasma) 等各種生物樣本的 NAD+/NADH 濃度和比值。
- 偵測範圍 0.78-50 µM，偵測極限 (LOD) 0.78 µM。
- 提供詳盡的樣本製備流程、結果計算方法，並隨附標準品與標準曲線 (standard curve) 設置指引。
- 步驟簡易，提高實驗效率。
實驗注意事項
- 加入工作試劑 (Working Reagent) 時應迅速，混合應簡短但徹底。
- 下列物質會干擾樣品製備，應避免使用：EDTA (>0.5 mM)、抗壞血酸 (ascorbic acid)、SDS (>0.2%)、疊氮化鈉 (sodium azide)、NP-40 (>1%) 及 Tween-20 (>1%)。
科學背景
菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸 (nicotinamide adenine dinucleotide, NAD) 是一種參與多種氧化還原反應 (redox reactions) 的酵素輔助因子 (cofactor)。NAD 作為電子載體 (electron carrier)，在氧化態 (NAD+) 與還原態 (NADH) 之間循環。除了在氧化還原反應中發揮作用外，NAD 在二磷酸腺苷核糖基化反應 (ADP-ribosylation reactions) 中也發揮關鍵作用，並且是去乙醯酶 (sirtuins) 的受質。
套組內容物
| Kit components | Size | Storage conditions | |
| 48 T | 96 T | ||
| Assay Buffer | 7.5 mL | 15 mL | 4℃ |
| EtOH Solution | 1 mL | 2 mL | 4℃ |
| WST-8 | 300 μL | 600 μL | -20℃, protected from light |
| Enhancer | 60 µL | 120 µL | -20℃, protected from light |
| NAD Cycling Enzyme Mix | 60 μL | 120 μL | -20℃, protected from light |
| NAD Standard (10 mM) | 100 µL | 200 µL | -20℃, protected from light |
| NAD Extraction Buffer | 6 mL | 12 mL | 4℃ |
| NADH Extraction Buffer | 6 mL | 12 mL | 4℃ |
儲存條件
在建議儲存條件下可穩定保存 6 個月。