CheKine™ 粒線體活性氧 (ROS) 產生速率螢光測定試劑盒
CheKine™ Mitochondrial Reactive Oxygen Species (ROS) Production Rate Fluorometric Assay Kit
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產品簡介
本試劑盒提供了一種簡單、靈敏且快速的方法，用於偵測粒線體活性氧的產生速率 (the rate of mitochondrial ROS production)。其偵測原理是利用螢光探針 DCFH-DA (2′,7′-Dichlorofluorescin Diacetate)。DCFH-DA 可擴散穿過粒線體膜，並被粒線體內的酯酶 (esterase) 水解形成不具螢光的 DCFH。隨後 DCFH 會被活性氧 (reactive oxygen species, ROS) 氧化，形成具有明亮綠色螢光的 DCF 分子（Ex/Em = 488/525 nm）。DCF 螢光強度增加的速率與粒線體內 ROS 的生成速率成正比。
主要特色
- 適用於多種類型的生物樣本，包含動植物組織、細胞及真菌等。
- 流程簡單便利，已針對微量盤分析儀檢測進行優化。
實驗注意事項
- 新鮮樣本是獲得良好結果的必要條件。如果無法立即進行檢測，建議在儲存樣本前完成樣本製備步驟。
- 如不立即進行檢測，樣本可在 -80°C 保存一個月。
- 建議對樣本進行數個稀釋梯度檢測，以確保讀值落在標準曲線範圍內。
科學背景
活性氧 (reactive oxygen species, ROS) 是氧正常代謝的天然副產物，包括超氧自由基 (superoxide radicals)、過氧化氫 (hydrogen peroxide, H2O2) 及其下游產物過氧化物 (peroxides) 與氫氧化物 (hydroxides)。研究顯示，體內超過 95% 的 ROS 來自粒線體 (mitochondria)，其失衡引起的氧化壓力 (oxidative stress) 與細胞生長增殖、發育分化、老化及細胞凋亡 (apoptosis) 等多種生理和病理過程密切相關。正常情況下，細胞內的抗氧化防禦系統 (antioxidant defense system) 與氧自由基 (oxygen free radicals) 處於平衡狀態，細胞內 ROS 水平維持在較低的生理範圍內。病理狀態下，此平衡被打破，細胞內過量的 ROS 會破壞粒線體酵素、脂質與核酸。同時，ROS 也會攻擊粒線體 DNA (mitochondrial DNA, mtDNA)，造成氧化損傷 (oxidative damage)，進而導致粒線體 ATP 合成量減少、粒線體膜電位 (mitochondrial membrane potential) 破壞等結構與功能改變。
套組內容物
| Kit components | Size (96 T) | Storage conditions |
| Extraction Buffer | 60 mL×2 | 4℃ |
| Reagent Ⅰ | 50 mL | 4℃ |
| Reagent Ⅱ | 1.5 mL | -20℃, protected from light |
| Reagent Ⅲ | Powder×1 vial | 4℃, protected from light |
儲存條件
在建議儲存條件下可穩定保存 12 個月。