CheKine™ 活性氧 (ROS) 檢測試劑盒
CheKine™ Reactive Oxygen Species (ROS) Detection Fluorometric Assay Kit
廠牌
產品簡介
本試劑盒提供了一種簡單、靈敏且快速的活性氧 (reactive oxygen species, ROS) 偵測方法。其偵測原理是利用螢光探針 DCFH-DA。DCFH-DA 是一種具細胞通透性的靈敏探針，可用於偵測活細胞內的 ROS 活性氧水平。DCFH-DA 在穿透細胞膜進入細胞後，會被細胞內的酯酶 (esterase) 水解為 DCFH。DCFH 本身不發出螢光且無法穿過細胞膜，被 ROS 氧化後會形成具有明亮綠色螢光的 DCF 分子（Ex/Em = 488/525 nm）。透過使用流式細胞儀或螢光顯微鏡偵測螢光訊號，即可分析細胞內活性氧的含量。
主要特色
- 基於螢光探針 DCFH-DA，可簡單、靈敏且快速地偵測活細胞內的 ROS 活性氧含量。
- 隨附陽性對照組試劑，增加實驗彈性與便利性。
- 已針對流式細胞儀和螢光顯微鏡檢測進行優化。
實驗注意事項
- 試劑管理：請勿混用不同批號或不同廠牌的試劑，否則可能導致結果異常。
- 操作細節：混合或配製反應試劑時應避免產生氣泡，並確切更換 pipette tips 以防止交叉污染。
- 溫度條件控制：實驗開始前，請確保所有試劑和設備均處於適宜溫度。
- 陽性對照組使用：陽性對照組試劑 (H2O2) 的建議工作濃度為 50 μM（視細胞類型建議在 50-250 μM 之間）。刺激 30 分鐘至 4 小時後，ROS 水平將顯著升高。不同細胞對陽性對照組試劑的反應可能差異極大，若 30 分鐘後無明顯上升，可延長刺激時間或增加濃度；若螢光訊號過強，則應縮短時間或降低濃度。ROS 陽性對照組 (H2O2) 僅作為樣本的陽性參考，並非所有實驗組別都需要加入陽性對照組試劑。
- 探針稀釋與孵育：若陰性對照組訊號過強，可將 DCFH-DA 探針稀釋至 1:2,000-1:5,000（終濃度 2-5 μM）。探針孵育時間可在 15-60 分鐘之間調整。
- 背景與曝光控制：探針孵育後，務必清洗掉未結合的探針，以避免產生高背景干擾。讀取結果時應盡量縮短曝光時間，且對照組與實驗組的曝光時間必須保持一致。
- 即時偵測：探針孵育完成後，除了必要的刺激時間外，應盡量縮短後續的偵測時間，以減少各種可能的實驗誤差。
科學背景
活性氧 (reactive oxygen species, ROS) 是氧正常代謝的天然副產物，在細胞訊號傳導和體內平衡中發揮重要作用。然而，在氧化壓力 (oxidative stress) 狀態下，ROS 水平會大幅增加。ROS 的累積會嚴重破壞細胞結構。氧化壓力在心血管疾病、糖尿病、骨質疏鬆症、中風、發炎性疾病、神經退化性疾病和癌症等疾病的研究中具有關鍵意義。偵測 ROS 濃度有助於了解氧化壓力如何調節各種細胞內傳導路徑。
套組內容物
| Kit component | Size | Storage conditions | |
| 50 T | 100 T | ||
| DCFH-DA (10 mM) | 0.05 mL | 0.1 mL | -20℃, protected from light |
| Positive Control (50 mM) | 0.5 mL | 1 mL | -20℃ |
儲存條件
在建議儲存條件下可穩定保存 12 個月。