CheKine™ 穀胱甘肽還原酶 (GR) 活性檢測試劑盒
CheKine™ Micro Glutathione Reductases (GR) Activity Assay Kit
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產品簡介
本試劑盒提供了一種簡便的比色分析法，用於偵測動物組織、細胞、細菌或生物體液等各種生物樣本中的穀胱甘肽還原酶 (glutathione reductase, GR) 活性。其偵測原理是穀胱甘肽還原酶能利用 NADPH 所提供的氫，將氧化型穀胱甘肽 (GSSG) 還原為還原型穀胱甘肽 (GSH)，同時生成 NADP+。由於 NADPH 在 340 nm 具有特徵吸收峰，而其反應後的產物 NADP+ 在此波長下無吸收，因此可以透過偵測 340 nm 吸光值的下降速率，計算出 NADPH 的消耗速率，進而定量樣本中的穀胱甘肽還原酶活性。
主要特色
- 適用於多種類型的生物樣本，包含血清 (serum)、血漿 (plasma)、動物組織、細胞及細菌等。
- 操作步驟簡單，並提供詳細的樣品製備和結果計算方法，確保實驗結果精確可靠。
實驗注意事項
- 需使用 96 孔可透 UV 平底盤 (96 well clear flat bottom UV-transparent microplate) 或微量石英比色皿 (Micro quartz cuvette)。
- 所有操作均需在冰上進行，酵素活性測定應於當日完成，以避免均質液反覆凍融。
- 檢測細胞內 GR 穀胱甘肽還原酶活性時，細胞數量必須在 3-5 x 106 之間；細胞內 GR 的萃取可透過研磨或超音波處理進行，不可使用裂解液處理細胞。
- 檢測前，應使用 2-3 個樣本進行預測試，以確保 180 秒內吸光度的變化呈線性。
- 哺乳動物組織樣本通常需用 Assay Buffer 稀釋 2 至 5 倍。
- 測定過程應快速進行，僅需設置 1 至 2 個空白孔 (blank well)。
- 反應溫度會影響實驗結果。哺乳動物樣本的反應溫度為 37℃，其他物種樣本的反應溫度為 25℃。
科學背景
穀胱甘肽還原酶 (glutathione reductase, GR) 是一種廣泛存在於真核生物和原核生物中的黃素蛋白氧化還原酶 (flavin protein redox enzyme)。穀胱甘肽還原酶負責催化氧化型穀胱甘肽 (GSSG) 還原為穀胱甘肽 (GSH)，是穀胱甘肽氧化還原循環 (glutathione redox cycle) 中的關鍵酵素之一（在昆蟲中，穀胱甘肽還原酶通常被硫氧還蛋白還原酶 (thioredoxin reductase, TrxR) 取代）。穀胱甘肽還原酶 (GR) 催化 NADPH 還原 GSSG 產生 GSH，有助於維持體內 GSH/GSSG 的比例平衡。穀胱甘肽還原酶在清除氧化壓力 (oxidative stress) 反應中的活性氧 (reactive oxygen species, ROS) 方面發揮關鍵作用，同時也參與了抗壞血酸-穀胱甘肽循環 (ascorbate-glutathione cycle) 路徑。
套組內容物
| Kit components | Size | Storage conditions | |
| 96 T | 96 T×5 | ||
| Assay Buffer | 100 mL | 100 mL×5 | 4℃ |
| Substrate | 2 mL | 2 mL×5 | 4℃, protected from light |
| GR Cofactor | 1 | 1×5 | -20℃, protected from light |
儲存條件
在建議儲存條件下可穩定保存 12 個月。