時差式螢光是一種利用螢光壽命的差異來提高測量靈敏度和準確性的技術。TRF 通常用於減少背景螢光干擾，並增強信號的特異性，特別適合用於微量樣本或複雜生物樣本的分析。
時差式螢光工作原理
時差式螢光的原理是基於螢光分子在被激發後會隨時間逐漸衰減至基態的特性。TRF 通過在激發光源關閉後稍作延遲，再進行螢光強度的測量，藉此排除背景短壽命螢光或自體螢光的影響，並只測量來自長壽命螢光分子的信號。
時差式螢光特點
- 減少背景干擾：由於在激發光結束後才開始測量，可有效消除大多數背景螢光（如短壽命螢光或自體螢光）的影響。
- 增強靈敏度：能夠檢測到更低濃度的螢光分子，提升了檢測靈敏度。
- 更高的訊噪比：僅測量長壽命螢光信號，降低了背景雜訊，提高了訊號雜訊比。
時差式螢光的應用
- 生物醫學研究：廣泛應用於免疫分析和分子診斷中，例如 ELISA 的高靈敏度測量。
- 藥物篩選：時差式螢光技術用於高通量篩選中，以快速且準確地檢測藥物和標靶之間的結合反應。
- 環境檢測：在水質分析中，用於檢測水體中的微量污染物和生物標誌物。
常用的長壽命螢光探針
TRF 中常使用 Europium (Eu)、Terbium (Tb) 等鑭系元素標記的螢光探針，這些探針具有長的螢光壽命（通常為毫秒等級），使其適合進行時差式螢光測量。