ERBB2 酪氨酸激酶穩定表現 Ba/F3 細胞株
ERBB2 Stable Ba/F3 Cell Line
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產品簡介
將激酶結構區域 (kinase domain) 與同源二聚化區域 (homodimerization domain) 融合（例如 ETV6 的 PNT 結構區域），可導致激酶活化。ERBB2 酪氨酸激酶穩定表現 Ba/F3 細胞株 (ERBB2 Stable Ba/F3 Cell Line) 表達活化的人類 ERBB2 酪胺酸激酶 (activated human ERBB2 tyrosine kinase)，其存活完全依賴於該激酶活性，因此即使在沒有 IL-3 的情況下，這細胞也能增殖。此細胞株穩定表現 MSCV-puro 載體 (MSCV-puro vector) 中的 GFP-ETV6-ERBB2 融合蛋白。
注意事項
僅供研究使用，不適用於診斷或治療用途
細胞型態
懸浮性、圓形 (Suspension, round)
來源組織
骨髓
物種
小鼠 (M. musculus)
捐贈者資訊
C3H，原始 B 細胞 (Pro B cells)
產品開箱和儲存說明
- 收到貨品時，請先目視檢查包裝容器是否有洩漏或破損的跡象。確認包裝容器完整後，立即將細胞轉移至低於 -130°C 的溫度下，最好在液態氮中儲存，直到準備使用。
- 為確保最佳的細胞活力，請在收到後儘快解凍試管並開始培養。如果需要繼續儲存，試管應儲存在 -130°C 以下或液態氮中。請勿儲存在 -70°C，因為這會導致細胞喪失活性。
細胞解凍 (Thawing)
- 將細胞放入 37°C 水浴中快速解凍，同時輕輕攪拌（最多 2 分鐘）。瓶蓋應保持在水面以上，以降低污染風險。
- 用 70% 酒精噴灑並擦拭試管外部，進行消毒。此後，所有操作應在生物安全櫃內無菌條件下進行。
- 將細胞懸浮液移至 15ml 無菌離心管中（內含 5ml 預熱的完全培養基）。以 125xg 離心 5-7 分鐘。
- 吸去上清液，不要攪動細胞沉澱物。將細胞沉澱物重新懸浮於預熱的完全培養基中，並分裝至 T25 培養瓶中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞生長條件
- 建議搭配使用 PriCoat™ T25 細胞培養瓶 (G299)。
- RPMI 1640 Medium (TM503) + 10% FBS（*請勿加熱去活化 heat-inactivate）+ 1% 青黴素/鏈黴素溶液 (Penicillin/Streptomycin Solution) (G255)，37.0°C，5% CO₂。
- 💡 注意：抗生素篩選藥物應在細胞完成第一次繼代後再加入培養基中，以確保細胞已從冷凍保存與解凍 (freeze-thaw) 過程中充分恢復。篩選條件：使用 1.0 µg/ml 嘌呤黴素 (Puromycin) (G264) 進行篩選。
細胞繼代培養 (Subculture)
- 只需將新鮮的完全培養基直接添加到培養物中即可。細胞密度不得超過 1×106 個細胞/毫升。
- 或者，透過離心更換完全培養基，將細胞沉澱物重新懸浮於新鮮的完全培養基中，並根據需要將適量的細胞懸浮液添加到新的培養容器中。
- 在建議條件下培養細胞。
細胞冷凍保存 (Cryopreservation)
使用細胞冷凍液 (TM024)，或含 10% DMSO 的完全培養基
細胞接種密度
150,000 – 200,000 cells/cm²
表現
Cas9 (pLenti-EF1a-Cas9-Puro)