AT2 基因敲除永生化小鼠腎近端小管細胞株(細胞水平藥物篩選)
AT2 Knockout Immortalized Mouse Renal Proximal Tubule Cell Line
廠牌
產品簡介
近端小管 (proximal tubule) 是腎元 (nephron) 管道系統的一部分，參與腎素–血管收縮素系統 (renin–angiotensin system) 的調控。該區域的細胞負責調節鈉離子與體液恆定 (sodium and volume homeostasis)，同時對全身血壓的維持具有重要作用。其中，血管收縮素 II (angiotensin II, Ang II) 及其受體 AT1 與 AT2，是此系統中研究最為廣泛的蛋白之一。
AT2 基因敲除永生化小鼠腎近端小管細胞株 (AT2 Knockout Immortalized Mouse Renal Proximal Tubule Cell Line) 是從攜帶猿猴病毒 SV40 大 T 抗原熱不穩定突變 (thermolabile mutation, tsA58) 的小鼠分離得到的條件永生化細胞株 (conditionally immortalized cell line)。在允許溫度下 (33°C)，於含有 IFN γ 的培養基中體外培養細胞，可誘導 SV40 大 T 抗原的功能性表現。在非允許溫度下 (37°C-39°C)，細胞會停止增殖。
可搭配其他相關細胞株產品——例如野生型細胞株 (T0624)，以及其他血管收縮素受體缺失細胞株 AT1A-/- (T0626)、AT1B-/- (T0627)、AT1A-/- AT1B-/- (T0628) ——進行近端小管區域中液體與電解質運輸 (fluid and electrolyte transportation) 的研究。
注意事項
僅供研究使用，不適用於診斷或治療用途
細胞型態
貼附性、鵝卵石狀 (Adherent, cobblestone)
來源組織
腎
物種
小鼠 (M. musculus)
捐贈者資訊
C57BL/6J x 永生鼠
產品開箱和儲存說明
- 收到貨品時，請先目視檢查包裝容器是否有洩漏或破損的跡象。確認包裝容器完整後，立即將細胞轉移至低於 -130°C 的溫度下，最好在液態氮中儲存，直到準備使用。
- 為確保最佳的細胞活力，請在收到後儘快解凍試管並開始培養。如果需要繼續儲存，試管應儲存在 -130°C 以下或液態氮中。請勿儲存在 -70°C，因為這會導致細胞喪失活性。
細胞解凍 (Thawing)
- 將細胞放入 37°C 水浴中快速解凍，同時輕輕攪拌（最多 2 分鐘）。瓶蓋應保持在水面以上，以降低污染風險。
- 用 70% 酒精噴灑並擦拭試管外部，進行消毒。此後，所有操作應在生物安全櫃內無菌條件下進行。
- 將細胞懸浮液移至 15ml 無菌離心管中（內含 5ml 預熱的完全培養基）。以 125xg 離心 5-7 分鐘。
- 吸去上清液，不要攪動細胞沉澱物。將細胞沉澱物重新懸浮於預熱的完全培養基中，並分裝至 T25 培養瓶中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞生長條件
- 培養貼附型細胞時，建議搭配使用 Applied 細胞外基質(第一型膠原蛋白) (G422)。
- PriGrow IV 培養基 (TM004) + 5% FBS + 10 nM aldosterone + 50 μM L-ascorbic acid 2-phosphate + 4 μg/mL dexamethasone + 10 ng/ml rmEGF (Z200025) + 5 μg/mL insulin (Z101065) + 20 nM sodium selenite + 5 μg/mL transferrin + 1 nM T3 + 10 U/mL IFNG (Z200085) + 1% 青黴素/鏈黴素溶液 (Penicillin/Streptomycin Solution) (G255)，33.0°C，5% CO₂。
細胞繼代培養 (Subculture)
以下體積適用於 T75 細胞培養瓶，請依培養容器大小按比例增減體積。當細胞覆蓋率達到 80% 滿度時，即可進行繼代培養。
- 吸出培養基，並在培養容器中加入 2-3ml 預熱的 0.25% Trypsin-EDTA 胰蛋白酶 (TM050)。
- 在顯微鏡下觀察細胞是否自附著表面脫落分離（通常需要 2-10 分鐘）。對於難以脫離的細胞，可置於 37°C 下，靜置幾分鐘以促進脫離。
- 將等體積的完全培養基加入培養容器中，以中和 Trypsin-EDTA 胰蛋白酶。
- 將培養懸浮液轉移至無菌離心管中，125xg 離心 5 分鐘。實際離心時間和轉速可能因細胞類型而異。
- 吸出上清液，用預熱的新鮮完全培養基重新懸浮細胞沉澱物。根據需要，將適量的細胞懸浮液加入新的培養容器中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞冷凍保存 (Cryopreservation)
使用細胞冷凍液 (TM024)，或含 10% DMSO 的完全培養基
細胞永生化方法
從攜帶溫度敏感型猿猴病毒 40 腫瘤抗原 (temperature-sensitive simian virus 40 tumor antigen (tsA58)) 的基因轉殖小鼠 (C57BL/6J x Immortomouse) 分離而得