永生化人類正常尿路上皮細胞 – hTERT
Immortalized Normal Human Urothelial Cells (NHU) – hTERT
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產品簡介
永生化正常人尿路上皮細胞 (NHU) – hTERT 透過逆轉錄病毒轉導 (pLXSN-hTERT) 實現永生化。永生化細胞在 G418 存在下進行篩選（篩選濃度為 0.1 mg/mL）。
注意事項
僅供研究使用，不適用於診斷或治療用途
細胞型態
貼附性、上皮樣 (Adherent, epithelial-like)
來源組織
泌尿道
物種
人類
捐贈者資訊
女性，63 歲，輸尿管，正常
產品開箱和儲存說明
- 收到貨品時，請先目視檢查包裝容器是否有洩漏或破損的跡象。確認包裝容器完整後，立即將細胞轉移至低於 -130°C 的溫度下，最好在液態氮中儲存，直到準備使用。
- 為確保最佳的細胞活力，請在收到後儘快解凍試管並開始培養。如果需要繼續儲存，試管應儲存在 -130°C 以下或液態氮中。請勿儲存在 -70°C，因為這會導致細胞喪失活性。
細胞解凍 (Thawing)
- 將細胞放入 37°C 水浴中快速解凍，同時輕輕攪拌（最多 2 分鐘）。瓶蓋應保持在水面以上，以降低污染風險。
- 用 70% 酒精噴灑並擦拭試管外部，進行消毒。此後，所有操作應在生物安全櫃內無菌條件下進行。
- 將細胞懸浮液移至 15ml 無菌離心管中（內含 5ml 預熱的完全培養基）。以 125xg 離心 5-7 分鐘。
- 吸去上清液，不要攪動細胞沉澱物。將細胞沉澱物重新懸浮於預熱的完全培養基中，並分裝至 T25 培養瓶中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞生長條件
- 培養貼附型細胞時，建議搭配使用 PriCoat™ T25 細胞培養瓶 (G299) 或 Applied 細胞外基質(第一型膠原蛋白) (G422)。
- PriGrow I 培養基 (TM001) + 25 μg/ml BPE + 0.15 ng/ml hEGF (Z100139) + 30 ng/ml cholera toxin (Sigma) + 5 μg/ml gentamycin + 1% 青黴素/鏈黴素溶液 (Penicillin/Streptomycin Solution) (G255)，37.0°C，5% CO₂。
- 💡 注意：建議細胞覆蓋率達到 70% 時進行繼代培養。請勿超過 85% 滿度。
細胞繼代培養 (Subculture)
以下體積適用於 T75 細胞培養瓶，請依培養容器大小按比例增減體積。當細胞覆蓋率達到 70% 滿度時，進行繼代培養。細胞覆蓋率不要超過 85%，否則可能會影響細胞增生。
- 吸出培養基，並在培養容器中加入 2-3ml 預熱的 0.25% Trypsin-EDTA 胰蛋白酶 (TM050)。
- 在顯微鏡下觀察細胞是否自附著表面脫落分離（通常需要 2-10 分鐘）。對於難以脫離的細胞，可置於 37°C 下，靜置幾分鐘以促進脫離。
- 將等體積的完全培養基加入培養容器中，以中和 Trypsin-EDTA 胰蛋白酶。
- 將培養懸浮液轉移至無菌離心管中，125xg 離心 5 分鐘。實際離心時間和轉速可能因細胞類型而異。
- 吸出上清液，用預熱的新鮮完全培養基重新懸浮細胞沉澱物。根據需要，將適量的細胞懸浮液加入新的培養容器中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞冷凍保存 (Cryopreservation)
使用細胞冷凍液 (TM024)，或含 10% DMSO 的完全培養基
細胞接種密度
1,000 cells/cm²
稀釋比例 (Split ratio)
1:3
細胞倍增時間
16 – 20 小時
細胞永生化方法
利用攜帶有 hTERT 基因的逆轉錄病毒 (pLXSN-hTERT) 實現永生化
表現
新黴素抗藥性基因 (Neomycin resistance)