永生化小鼠小膠質細胞
Immortalized Mouse Microglia (SIM-A9)
廠牌
產品簡介
刺激小膠質細胞 (microglia) 可透過添加 2.5 ng/mL 的脂多醣 (LPS) 或 20 μM β-類澱粉蛋白纖維 (β-amyloid fibrils, Aβ₁₋₄₂) 來誘發反應。當小膠質細胞受到 LPS 或 IL-4 刺激時，會在兩種活化型態間轉換：一種是促發炎型的 M1 表型，特徵為 iNOS 與 COX-2 表現上升，並涉及 IκB 與酪胺酸激酶 (tyrosine kinase) 訊息傳導途徑；另一種則是具組織再生與修復功能的 M2 表型，其特徵為精胺酶-1 (Arg-1) 表現增加。
小膠質細胞是存在於腦部與脊髓中的駐留型巨噬細胞 (resident macrophages)，為中樞神經系統的第一道免疫防線。自發性永生化小鼠小膠質細胞株 (SIM-A9) 除了表現有典型的小膠質細胞標記 (如 CD68 與 Iba1) 以外，還保留了對外源性發炎刺激 (如 LPS 與 β-amyloid) 的反應能力，能分泌細胞激素 (cytokines) 與一氧化氮 (nitric oxide)，以及吞噬生物性碎片 (phagocytose biological debris)。
在 LPS 或 IL-4 刺激下，SIM-A9 永生化小鼠小膠質細胞株同樣能在 M1 與 M2 表型間轉換，顯示其具備與初代小膠質細胞相似的生理特性與關鍵特徵，因此非常適合作為研究外界刺激對小膠質細胞遷移 (migration)、增生 (proliferation) 與吞噬作用 (phagocytosis) 影響性的實驗模型。
注意事項
僅供研究使用，不適用於診斷或治療用途
細胞型態
貼附性、圓形或多邊形 (Adherent, round or polygonal)
來源組織
腦
物種
小鼠 (M. musculus)
捐贈者資訊
C57BL/6 小鼠
產品開箱和儲存說明
- 收到貨品時，請先目視檢查包裝容器是否有洩漏或破損的跡象。確認包裝容器完整後，立即將細胞轉移至低於 -130°C 的溫度下，最好在液態氮中儲存，直到準備使用。
- 為確保最佳的細胞活力，請在收到後儘快解凍試管並開始培養。如果需要繼續儲存，試管應儲存在 -130°C 以下或液態氮中。請勿儲存在 -70°C，因為這會導致細胞喪失活性。
細胞解凍 (Thawing)
- 將細胞放入 37°C 水浴中快速解凍，同時輕輕攪拌（最多 2 分鐘）。瓶蓋應保持在水面以上，以降低污染風險。
- 用 70% 酒精噴灑並擦拭試管外部，進行消毒。此後，所有操作應在生物安全櫃內無菌條件下進行。
- 將細胞懸浮液移至 15ml 無菌離心管中（內含 5ml 預熱的完全培養基）。以 125xg 離心 5-7 分鐘。
- 吸去上清液，不要攪動細胞沉澱物。將細胞沉澱物重新懸浮於預熱的完全培養基中，並分裝至 T25 培養瓶中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞生長條件
- 培養貼附型細胞時，建議搭配使用 PriCoat™ T25 細胞培養瓶 (G299) 或 Applied 細胞外基質(第一型膠原蛋白) (G422)。
- PriGrow IV 培養基 (TM004) + 10% FBS（*加熱去活化 heat-inactivate）+ 5% horse serum + 1% 青黴素/鏈黴素溶液 (Penicillin/Streptomycin Solution) (G255)，37.0°C，5% CO₂。
細胞繼代培養 (Subculture)
以下體積適用於 T75 細胞培養瓶，請依培養容器大小按比例增減體積。當細胞覆蓋率達到 80% 滿度時，即可進行繼代培養。
- 吸出培養基，並在培養容器中加入 2-3ml 預熱的 0.25% Trypsin-EDTA 胰蛋白酶 (TM050)。
- 在顯微鏡下觀察細胞是否自附著表面脫落分離（通常需要 2-10 分鐘）。對於難以脫離的細胞，可置於 37°C 下，靜置幾分鐘以促進脫離。
- 將等體積的完全培養基加入培養容器中，以中和 Trypsin-EDTA 胰蛋白酶。
- 將培養懸浮液轉移至無菌離心管中，125xg 離心 5 分鐘。實際離心時間和轉速可能因細胞類型而異。
- 吸出上清液，用預熱的新鮮完全培養基重新懸浮細胞沉澱物。根據需要，將適量的細胞懸浮液加入新的培養容器中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞冷凍保存 (Cryopreservation)
使用細胞冷凍液 (TM024)，或含 10% DMSO 的完全培養基
細胞接種密度
45,000 – 50,000 cells/cm²
稀釋比例 (Split ratio)
1:2
細胞倍增時間
30 – 40 小時
細胞永生化方法
自發性永生化
表現
CD68 和 Iba1
STR 分析
- 1-1 : 16,17
- 1-2 : 19,
- 2-1 : 16,
- 3-2 : 14,
- 4-2 : 20.3
- 5-5 : 17,
- 6-4 : 18,
- 6-7 : 15,
- 7-1 : 26.2,
- 8-1 : 16,
- 11-2 : 16,
- 12-1 : 17,
- 13-1 : 17.1,
- 15-3 : 22.3,23.3
- 17-2 : 15,
- 18-3 : 16,17
- 19-2 : 13,
- X-1 : 27,
- TH01 : –
- D5S818 : –