永生化小鼠巨噬細胞
Immortalized Mouse Macrophage Cells (BMA3.1A7)
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產品簡介
BMA3.1A7 永生化小鼠巨噬細胞株源自成年雌性 C57BL/6 小鼠的骨髓，透過 raf 和 myc 致癌基因的過度表現而自發性地永生化，外觀呈現典型的「荷包蛋狀 (fried egg morphology)」，即細胞本體圓潤、內含大量囊泡 (vesicles)。研究顯示，BMA3.1A7 永生化小鼠巨噬細胞株與骨髓衍生巨噬細胞 (bone marrow-derived macrophages, BMDM) 在多項表面標記 (surface marker) 上具有類似的表現，例如 iNOS、Arginase-1、CD86、MHC I、MHC II 及 CD206，因此常被視為可替代初代巨噬細胞的模型。這種相似性對研究巨噬細胞的可塑性與病原反應多樣性非常有幫助。此外，BMA3.1A7 永生化小鼠巨噬細胞株可進行極化 (polarization)，不同極化狀態下對病毒感染的易感性 (susceptibility to viral infection) 也會改變，因此是探討「巨噬細胞極化與病毒感染關係」的實用模型。本細胞株通過以下品質檢測試驗：流式細胞儀 (Flow cytometry)、精氨酸酶測定 (Arginase assay)、一氧化氮測定 (Nitric oxide assay) 和 qRT-PCR。
注意事項
僅供研究使用，不適用於診斷或治療用途
細胞型態
貼附性、不規則的「煎蛋」形態 (Adherent, irregular “fried egg” morphology)
來源組織
血
物種
小鼠 (M. musculus)
捐贈者資訊
成年雌性 C57BL/6 小鼠
產品開箱和儲存說明
- 收到貨品時，請先目視檢查包裝容器是否有洩漏或破損的跡象。確認包裝容器完整後，立即將細胞轉移至低於 -130°C 的溫度下，最好在液態氮中儲存，直到準備使用。
- 為確保最佳的細胞活力，請在收到後儘快解凍試管並開始培養。如果需要繼續儲存，試管應儲存在 -130°C 以下或液態氮中。請勿儲存在 -70°C，因為這會導致細胞喪失活性。
細胞解凍 (Thawing)
- 將細胞放入 37°C 水浴中快速解凍，同時輕輕攪拌（最多 2 分鐘）。瓶蓋應保持在水面以上，以降低污染風險。
- 用 70% 酒精噴灑並擦拭試管外部，進行消毒。此後，所有操作應在生物安全櫃內無菌條件下進行。
- 將細胞懸浮液移至 15ml 無菌離心管中（內含 5ml 預熱的完全培養基）。以 125xg 離心 5-7 分鐘。
- 吸去上清液，不要攪動細胞沉澱物。將細胞沉澱物重新懸浮於預熱的完全培養基中，並分裝至 T25 培養瓶中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞生長條件
- 培養貼附型細胞時，建議搭配使用 PriCoat™ T25 細胞培養瓶 (G299) 或 Applied 細胞外基質(第一型膠原蛋白) (G422)。
- PriGrow II 培養基 (TM002) + 10% FBS（*請勿加熱去活化 heat-inactivate）+ 2 mM L-Glutamine (G275) + 1% Non-Essential Amino Acids (TM068) + 1% HEPES (TM058) + 55 µM B-mercaptoethanol + 1% 青黴素/鏈黴素溶液 (Penicillin/Streptomycin Solution) (G255)，37.0°C，5% CO₂。
細胞繼代培養 (Subculture)
以下體積適用於 T75 細胞培養瓶，請依培養容器大小按比例增減體積。當細胞覆蓋率達到 80% 滿度時，即可進行繼代培養。
- 吸出培養基，並在培養容器中加入 2-3ml 預熱的 0.25% Trypsin-EDTA 胰蛋白酶 (TM050)。
- 在顯微鏡下觀察細胞是否自附著表面脫落分離（通常需要 2-10 分鐘）。對於難以脫離的細胞，可置於 37°C 下，靜置幾分鐘以促進脫離。
- 將等體積的完全培養基加入培養容器中，以中和 Trypsin-EDTA 胰蛋白酶。
- 將培養懸浮液轉移至無菌離心管中，125xg 離心 5 分鐘。實際離心時間和轉速可能因細胞類型而異。
- 吸出上清液，用預熱的新鮮完全培養基重新懸浮細胞沉澱物。根據需要，將適量的細胞懸浮液加入新的培養容器中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞冷凍保存 (Cryopreservation)
使用細胞冷凍液 (TM024)，或含 10% DMSO 的完全培養基
表現
iNOS、Arginase-1、CD86、MHC I、MHC II 和 CD206
STR 分析
- 1-1 : 16
- 1-2 : 19
- 2-1 : 16
- 3-2 : 14
- 4-2 : 20.3,21.3
- 5-5 : 17
- 6-4 : 18
- 6-7 : 15
- 7-1 : 26.2
- 8-1 : 16,17
- 9-2 : 18
- 11-2 : 16
- 12-1 : 17
- 13-1 : 17
- 15-3 : 22.3
- 17-2 : 15
- 18-3 : 16
- 19-2 : 13
- X-1 : 27