永生化小鼠肝星狀細胞 – SV40
Immortalized Mouse Hepatic Stellate Cells – SV40
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產品簡介
永生化小鼠肝星狀細胞 – SV40 是透過酵素消化 (enzymatic digestion) 和 Percoll 密度梯度離心法，從 C57/Bl6 野生型小鼠分離出的初代細胞，再經過 pCMV SV40T 轉染及潮黴素 B (hygromycin B) 篩選所得到的永生化細胞株。永生化小鼠肝星狀細胞 – SV40 在肝纖維化 (liver fibrosis) 研究中具有重要意義，因為它是參與疤痕組織形成 (formation of scar tissue) 的主要細胞類型。此細胞特別適用於發炎反應 (inflammatory responses) 的相關研究，多項實驗證實，在 LPS 刺激下，永生化小鼠肝星狀細胞中 NF-κB 和發炎細胞激素 (inflammatory cytokines) 的表現量會發生變化。本細胞通過以下品質檢測試驗：基因型分析 (genotype analysis)、NF-κB 活化試驗 (NF-κB activation assay)、細胞激素 ELISA 分析測定 (cytokine ELISA assays) 和 3[H]-胸腺嘧啶細胞增殖檢測 (3[H]-thymidine cell proliferation assay)。
注意事項
僅供研究使用，不適用於診斷或治療用途
細胞型態
貼附性、多邊形 (Adherent, polygonal)
來源組織
肝
物種
小鼠 (M. musculus)
捐贈者資訊
C57/Bl6 WT 小鼠
產品開箱和儲存說明
- 收到貨品時，請先目視檢查包裝容器是否有洩漏或破損的跡象。確認包裝容器完整後，立即將細胞轉移至低於 -130°C 的溫度下，最好在液態氮中儲存，直到準備使用。
- 為確保最佳的細胞活力，請在收到後儘快解凍試管並開始培養。如果需要繼續儲存，試管應儲存在 -130°C 以下或液態氮中。請勿儲存在 -70°C，因為這會導致細胞喪失活性。
細胞解凍 (Thawing)
- 將細胞放入 37°C 水浴中快速解凍，同時輕輕攪拌（最多 2 分鐘）。瓶蓋應保持在水面以上，以降低污染風險。
- 用 70% 酒精噴灑並擦拭試管外部，進行消毒。此後，所有操作應在生物安全櫃內無菌條件下進行。
- 將細胞懸浮液移至 15ml 無菌離心管中（內含 5ml 預熱的完全培養基）。以 125xg 離心 5-7 分鐘。
- 吸去上清液，不要攪動細胞沉澱物。將細胞沉澱物重新懸浮於預熱的完全培養基中，並分裝至 T25 培養瓶中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞生長條件
- 培養貼附型細胞時，建議搭配使用 PriCoat™ T25 細胞培養瓶 (G299) 或 Applied 細胞外基質(第一型膠原蛋白) (G422)。
- PriGrow III 培養基 (TM003) + 10% FBS（*請勿加熱去活化 heat-inactivate）+ 1% 青黴素/鏈黴素溶液 (Penicillin/Streptomycin Solution) (G255)，37.0°C，5% CO₂。
細胞繼代培養 (Subculture)
細胞對胰蛋白酶 (trypsin) 敏感，建議改用溫和解離液 (TM080) 進行繼代培養。以下體積適用於 T75 細胞培養瓶，請依培養容器大小按比例增減體積。當細胞覆蓋率達到 80% 滿度時，即可進行繼代培養。
- 吸出培養基，並在培養容器中加入 2-3ml 預熱的溫和解離液 (TM080)。
- 在顯微鏡下觀察細胞是否自附著表面脫落分離（通常需要 2-10 分鐘）。對於難以脫離的細胞，可置於 37°C 下，靜置幾分鐘以促進脫離。
- 將等體積的完全培養基加入培養容器中，以中和溫和解離液。
- 將培養懸浮液轉移至無菌離心管中，125xg 離心 5 分鐘。實際離心時間和轉速可能因細胞類型而異。
- 吸出上清液，用預熱的新鮮完全培養基重新懸浮細胞沉澱物。根據需要，將適量的細胞懸浮液加入新的培養容器中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞冷凍保存 (Cryopreservation)
使用細胞冷凍液 (TM024)，或含 10% DMSO 的完全培養基
細胞接種密度
20,000 – 40,000 cells/cm²
細胞倍增時間
35 – 45 小時
表現
對潮黴素 B 有抗藥性 (Hygromycin B resistance)
STR 分析
- 4-2 : 20.3,
- 5-5 : 17,
- 6-4 : 18,
- 6-7 : 17,
- 9-2 : 18,
- 12-1 : 17,
- 15-3 : 22.3,23.3
- 18-3 : 16,
- X-1 : 27,