永生化小鼠肝竇內皮細胞 – SV40
Immortalized Mouse Hepatic Sinusoidal Endothelial Cells – SV40
廠牌
產品簡介
肝竇內皮細胞 (HSEC) 是排列於肝竇內壁的獨特肝細胞亞群。它們的主要功能包括清除血液中的代謝廢物、調節周細胞 (pericyte) 收縮以及參與先天性免疫功能。永生化小鼠肝竇內皮細胞 – SV40 源自 C57BL/6 小鼠的 HSEC，保留了內皮細胞的特徵以及 HSEC 特有的標記物，例如 vWF 和 Caveolin-1。這些細胞能夠回應血管新生生長因子 (angiogenic growth factors) 的刺激而產生遷移，形成血管管狀結構，內吞 (endycytose) 乙醯化低密度脂蛋白 (AcLDL)，並分泌參與基質重塑的蛋白質。此外，這些細胞易於被逆轉錄病毒轉導。總結來說，永生化小鼠肝竇內皮細胞 – SV40 非常適合應用於肝臟內皮細胞生物學研究，包括移行能力 (motility) 和血管新生 (angiogenesis)。
注意事項
僅供研究使用，不適用於診斷或治療用途
細胞型態
貼附性、多邊形 (Adherent, polygonal)
來源組織
肝
物種
小鼠 (M. musculus)
捐贈者資訊
C57BL/6 小鼠
產品開箱和儲存說明
- 收到貨品時，請先目視檢查包裝容器是否有洩漏或破損的跡象。確認包裝容器完整後，立即將細胞轉移至低於 -130°C 的溫度下，最好在液態氮中儲存，直到準備使用。
- 為確保最佳的細胞活力，請在收到後儘快解凍試管並開始培養。如果需要繼續儲存，試管應儲存在 -130°C 以下或液態氮中。請勿儲存在 -70°C，因為這會導致細胞喪失活性。
細胞解凍 (Thawing)
- 將細胞放入 37°C 水浴中快速解凍，同時輕輕攪拌（最多 2 分鐘）。瓶蓋應保持在水面以上，以降低污染風險。
- 用 70% 酒精噴灑並擦拭試管外部，進行消毒。此後，所有操作應在生物安全櫃內無菌條件下進行。
- 將細胞懸浮液移至 15ml 無菌離心管中（內含 5ml 預熱的完全培養基）。以 125xg 離心 5-7 分鐘。
- 吸去上清液，不要攪動細胞沉澱物。將細胞沉澱物重新懸浮於預熱的完全培養基中，並分裝至 T25 培養瓶中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞生長條件
- 培養貼附型細胞時，建議搭配使用 PriCoat™ T25 細胞培養瓶 (G299) 或 Applied 細胞外基質(第一型膠原蛋白) (G422)。
- PriGrow I 培養基 (TM001) + 5% FBS（*請勿加熱去活化 heat-inactivate）+ 1% 青黴素/鏈黴素溶液 (Penicillin/Streptomycin Solution) (G255)，37.0°C，5% CO₂。
細胞繼代培養 (Subculture)
以下體積適用於 T75 細胞培養瓶，請依培養容器大小按比例增減體積。當細胞覆蓋率達到 80% 滿度時，即可進行繼代培養。
- 吸出培養基，並在培養容器中加入 2-3ml 預熱的 0.25% Trypsin-EDTA 胰蛋白酶 (TM050)。
- 在顯微鏡下觀察細胞是否自附著表面脫落分離（通常需要 2-10 分鐘）。對於難以脫離的細胞，可置於 37°C 下，靜置幾分鐘以促進脫離。
- 將等體積的完全培養基加入培養容器中，以中和 Trypsin-EDTA 胰蛋白酶。
- 將培養懸浮液轉移至無菌離心管中，125xg 離心 5 分鐘。實際離心時間和轉速可能因細胞類型而異。
- 吸出上清液，用預熱的新鮮完全培養基重新懸浮細胞沉澱物。根據需要，將適量的細胞懸浮液加入新的培養容器中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞冷凍保存 (Cryopreservation)
使用細胞冷凍液 (TM024)，或含 10% DMSO 的完全培養基
細胞接種密度
5,000 – 7,000 cells/cm²
稀釋比例 (Split ratio)
1:2 至 1:3
細胞倍增時間
22 – 32 小時
細胞永生化方法
以攜帶 SV40 T 基因的全身性 (pantropic) 重組慢病毒 (LV665) 進行連續傳代和轉導
表現
vWF 和 Caveolin-1
STR 分析
- 1-1 : 15,16
- 1-2 : 18
- 2-1 : 15,16
- 3-2 : 14,15
- 4-2 : 20.3
- 5-5 : 17,18
- 6-4 : 18
- 6-7 : 14,15
- 7-1 : 26.2
- 8-1 : 16
- 11-2 : 16,17
- 12-1 : 17
- 13-1 : 17.1
- 15-3 : 22.3
- 17-2 : 15
- 18-3 : 17
- 19-2 : 13
- X-1 : 28
- TH01 : –
- D5S818 : –