永生化小鼠星狀細胞 – SV40T
Immortalized Mouse Astrocytes – SV40T (IMA2.1)
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產品簡介
永生化小鼠星狀細胞 – SV40T (IMA2.1) 是適用於星狀細胞功能研究的細胞株。此細胞株的獨特之處在於它能夠代謝帕金森毒素 (parkinsonian toxin) MPTP（生成 MPP+），並且對促發炎 (pro-inflammatory) 刺激產生反應。此外，此細胞株也可用於神經元共同培養研究 (neuronal co-culture studies)，以模擬腦內環境。
在 IL-1β、TNF-α 和 IFN-γ 等細胞激素刺激下，永生化小鼠星狀細胞 – SV40T (IMA2.1) 的 NOS-2 和 COX-2 mRNA 表現量會增加，並釋放出多種發炎介質 (inflammatory mediators)。此細胞株具有穩定的星狀形態，並表現有 Nestin 和 CD44 等未成熟星狀細胞標記物，顯示此細胞屬於早期星狀細胞前體表型 (early-stage astrocyte precursor phenotype)。此外，它能夠透過谷氨酰胺合成酶 (glutamine synthase) 將谷氨酸 (glutamate) 轉化為谷氨酰胺 (glutamine)，這是 GFAP 陰性星狀細胞的特徵。
注意事項
僅供研究使用，不適用於診斷或治療用途
細胞型態
貼附性、星形 (Adherent, stellate shaped)
來源組織
腦
物種
小鼠 (M. musculus)
捐贈者資訊
Balb/c 小鼠，大腦皮質 (Cerebral Cortex)
產品開箱和儲存說明
- 收到貨品時，請先目視檢查包裝容器是否有洩漏或破損的跡象。確認包裝容器完整後，立即將細胞轉移至低於 -130°C 的溫度下，最好在液態氮中儲存，直到準備使用。
- 為確保最佳的細胞活力，請在收到後儘快解凍試管並開始培養。如果需要繼續儲存，試管應儲存在 -130°C 以下或液態氮中。請勿儲存在 -70°C，因為這會導致細胞喪失活性。
細胞解凍 (Thawing)
- 將細胞放入 37°C 水浴中快速解凍，同時輕輕攪拌（最多 2 分鐘）。瓶蓋應保持在水面以上，以降低污染風險。
- 用 70% 酒精噴灑並擦拭試管外部，進行消毒。此後，所有操作應在生物安全櫃內無菌條件下進行。
- 將細胞懸浮液移至 15ml 無菌離心管中（內含 5ml 預熱的完全培養基）。以 125xg 離心 5 分鐘。
- 吸去上清液，不要攪動細胞沉澱物。將細胞沉澱物重新懸浮於預熱的完全培養基中，並分裝至 T25 培養瓶中。
- 在建議的條件下培養細胞。
- 讓細胞在接下來的 24-48 小時內恢復並貼壁。細胞貼壁後，每 2-3 天更換一次培養基，或視需要更換。
細胞生長條件
- 培養貼附型細胞時，建議搭配使用 PriCoat™ T25 細胞培養瓶 (G299) 或 Applied 細胞外基質(第一型膠原蛋白) (G422)。
- PriGrow III 培養基 (TM003) + 10% FBS（*請勿加熱去活化 heat-inactivate）+ 1% 青黴素/鏈黴素溶液 (Penicillin/Streptomycin Solution) (G255)，37.0°C，5% CO₂。
細胞繼代培養 (Subculture)
以下體積適用於 T75 細胞培養瓶，請依培養容器大小按比例增減體積。當細胞覆蓋率達到 80% 滿度時，即可進行繼代培養。
- 吸出培養基，並在培養容器中加入 2-3ml 預熱的 0.25% Trypsin-EDTA 胰蛋白酶 (TM050)。
- 在顯微鏡下觀察細胞是否自附著表面脫落分離（通常需要 2-10 分鐘）。對於難以脫離的細胞，可置於 37°C 下，靜置幾分鐘以促進脫離。
- 將等體積的完全培養基加入培養容器中，以中和 Trypsin-EDTA 胰蛋白酶。
- 將培養懸浮液轉移至無菌離心管中，125xg 離心 5 分鐘。實際離心時間和轉速可能因細胞類型而異。
- 吸出上清液，用預熱的新鮮完全培養基重新懸浮細胞沉澱物。根據需要，將適量的細胞懸浮液加入新的培養容器中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞冷凍保存 (Cryopreservation)
使用細胞冷凍液 (TM024)，或含 10% DMSO 的完全培養基
細胞接種密度
5,000 – 10,000 cells/cm²
細胞倍增時間
20 – 30 小時
細胞永生化方法
連續傳代和轉染 SV40 T 表現質體 psV3neo
表現
Nestin 和 CD44