永生化人類角膜上皮細胞
Immortalized Human Corneal Epithelial Cells (HCE-S)
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產品簡介
角膜上皮細胞在初代培養中難以維持未分化狀態，因此過去建構永生化人類角膜上皮細胞株的成功嘗試大多侷限於致癌轉化方法 (oncogenic transformation)。永生化人類角膜上皮細胞 (HCE-S) 是從屍體角膜組織來源的纖維母細胞培養物中自發性形成的群體 (colonies)，隨後透過克隆分離 (clonally isolated) 和繼代培養，達到永生化所需的複製倍數。HCE-S 細胞在形態學上與初代培養細胞高度相似，表達一系列與角膜上皮細胞功能相關的標記物（如 ABCG2、Cytokeratin 3、PAX6、Integrins α9 和 Integrins β1），並且在增殖、遷移和划痕傷口實驗中 (proliferation, migration and scratch wound assays) 均對表皮生長因子 (epidermal growth factor) 有反應。HCE-S 細胞可以用來從事多方面的角膜上皮細胞生物學研究，例如再生 (regeneration) 以及探討細胞對生長因子、藥物和毒性的反應。其額外優勢是能夠在未塗層的基質上生長 (grow on uncoated substrates)，而無需像其他類似的細胞株那般需要培養基添加物的存在。
注意事項
僅供研究使用，不適用於診斷或治療用途
細胞型態
貼附性、上皮 (Adherent, epithelial)
來源組織
眼睛
物種
人類
捐贈者資訊
女性
產品開箱和儲存說明
- 收到貨品時，請先目視檢查包裝容器是否有洩漏或破損的跡象。確認包裝容器完整後，立即將細胞轉移至低於 -130°C 的溫度下，最好在液態氮中儲存，直到準備使用。
- 為確保最佳的細胞活力，請在收到後儘快解凍試管並開始培養。如果需要繼續儲存，試管應儲存在 -130°C 以下或液態氮中。請勿儲存在 -70°C，因為這會導致細胞喪失活性。
細胞解凍 (Thawing)
- 將細胞放入 37°C 水浴中快速解凍，同時輕輕攪拌（最多 2 分鐘）。瓶蓋應保持在水面以上，以降低污染風險。
- 用 70% 酒精噴灑並擦拭試管外部，進行消毒。此後，所有操作應在生物安全櫃內無菌條件下進行。
- 將細胞懸浮液移至 15ml 無菌離心管中（內含 5ml 預熱的完全培養基）。以 125xg 離心 5-7 分鐘。
- 吸去上清液，不要攪動細胞沉澱物。將細胞沉澱物重新懸浮於預熱的完全培養基中，並分裝至 T25 培養瓶中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞生長條件
- 培養貼附型細胞時，建議搭配使用 PriCoat™ T25 細胞培養瓶 (G299) 或 Applied 細胞外基質(第一型膠原蛋白) (G422)。
- PriGrow III 培養基 (TM003) + 10% FBS（*請勿加熱去活化 heat-inactivate）+ 1X GlutaMAX + 1% 青黴素/鏈黴素溶液 (Penicillin/Streptomycin Solution) (G255)，37.0°C，5% CO₂。
- 💡 注意：細胞以緻密聚落 (dense colonies) 的形式生長；當培養容器中的細胞覆蓋率達到 70% 時進行繼代培養。
細胞繼代培養 (Subculture)
以下體積適用於 T75 細胞培養瓶，請依培養容器大小按比例增減體積。當細胞覆蓋率達到 70% 滿度時，即可進行繼代培養。
- 吸出培養基，並在培養容器中加入 2-3ml 預熱的 0.25% Trypsin-EDTA 胰蛋白酶 (TM050)。
- 在顯微鏡下觀察細胞是否自附著表面脫落分離（通常需要 2-10 分鐘）。對於難以脫離的細胞，可置於 37°C 下，靜置幾分鐘以促進脫離。
- 將等體積的完全培養基加入培養容器中，以中和 Trypsin-EDTA 胰蛋白酶。
- 將培養懸浮液轉移至無菌離心管中，125xg 離心 5 分鐘。實際離心時間和轉速可能因細胞類型而異。
- 吸出上清液，用預熱的新鮮完全培養基重新懸浮細胞沉澱物。根據需要，將適量的細胞懸浮液加入新的培養容器中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞冷凍保存 (Cryopreservation)
使用細胞冷凍液 (TM024)，或含 10% DMSO 的完全培養基
細胞接種密度
30,000 – 50,000 cells/cm²
細胞倍增時間
52 – 62 小時
表現
Pancytokeratin、Cytokeratin 3、ABCG2、α9 integrin、PAX 6、β1 integrin 和 Mucin16 (accession number NM_001401501.2)