永生化人類角膜內皮細胞
Immortalized Human Corneal Endothelial Cells (IHCE)
廠牌
產品簡介
角膜內皮的作用是調節角膜水合作用 (corneal hydration)，這關鍵細胞層的功能障礙會逐漸導致角膜混濁，最終致使視力喪失和角膜失明 (corneal blindness)。利用 HPV16 E6/E7 基因建構的永生化人類角膜內皮細胞 (IHCE) 不僅保留了其特有的細胞生物標記（CX43、ZO-1 和 9.3E），並且在 1、8、10 和 18 號染色體上表現出相當程度的二倍體細胞遺傳學狀態，這顯示其具有正常的二倍體染色體狀態 (normal diploid chromosomal status)。
另有從同一捐贈者分離、採用相同永生化技術的永生化人類角膜角質形成細胞 (T0579) 和永生化人類角膜纖維母細胞 (T0578)，可供研究者藉由統一的模型系統進行角膜恆定 (cornea homeostasis) 及眼科疾病研究。
注意事項
僅供研究使用，不適用於診斷或治療用途
細胞型態
貼附性、鵝卵石狀 (Adherent, cobblestone)
來源組織
眼睛
物種
人類
捐贈者資訊
女性
產品開箱和儲存說明
- 收到貨品時，請先目視檢查包裝容器是否有洩漏或破損的跡象。確認包裝容器完整後，立即將細胞轉移至低於 -130°C 的溫度下，最好在液態氮中儲存，直到準備使用。
- 為確保最佳的細胞活力，請在收到後儘快解凍試管並開始培養。如果需要繼續儲存，試管應儲存在 -130°C 以下或液態氮中。請勿儲存在 -70°C，因為這會導致細胞喪失活性。
細胞解凍 (Thawing)
- 將細胞放入 37°C 水浴中快速解凍，同時輕輕攪拌（最多 2 分鐘）。瓶蓋應保持在水面以上，以降低污染風險。
- 用 70% 酒精噴灑並擦拭試管外部，進行消毒。此後，所有操作應在生物安全櫃內無菌條件下進行。
- 將細胞懸浮液移至 15ml 無菌離心管中（內含 5ml 預熱的完全培養基）。以 125xg 離心 5-7 分鐘。
- 吸去上清液，不要攪動細胞沉澱物。將細胞沉澱物重新懸浮於預熱的完全培養基中，並分裝至 T25 培養瓶中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞生長條件
- 培養貼附型細胞時，建議搭配使用 PriCoat™ T25 細胞培養瓶 (G299) 或 Applied 細胞外基質(第一型膠原蛋白) (G422)。
- PriGrow III 培養基 (TM003) + 10% FBS（*請勿加熱去活化 heat-inactivate）+ 5 ng/ml 人類 Insulin (Z101065) + 10 µg/ml 人類 Transferrin + 3 ng/ml sodium selenite + 10 nM hydrocortisone (TM066) + 10 nM β-estradiol + 10 ng/ml rhVEGF 165aa (Z100895) + 10 ng/ml rhEGF (Z100139) + 10 ng/ml Heparin + 2 mM L-glutamine (G275) + 1% 青黴素/鏈黴素溶液 (Penicillin/Streptomycin Solution) (G255)，37.0°C，5% CO₂。
細胞繼代培養 (Subculture)
以下體積適用於 T75 細胞培養瓶，請依培養容器大小按比例增減體積。當細胞覆蓋率達到 80% 滿度時，即可進行繼代培養。
- 吸出培養基，並在培養容器中加入 2-3ml 預熱的 0.25% Trypsin-EDTA 胰蛋白酶 (TM050)。
- 在顯微鏡下觀察細胞是否自附著表面脫落分離（通常需要 2-10 分鐘）。對於難以脫離的細胞，可置於 37°C 下，靜置幾分鐘以促進脫離。
- 將等體積的完全培養基加入培養容器中，以中和 Trypsin-EDTA 胰蛋白酶。
- 將培養懸浮液轉移至無菌離心管中，125xg 離心 5 分鐘。實際離心時間和轉速可能因細胞類型而異。
- 吸出上清液，用預熱的新鮮完全培養基重新懸浮細胞沉澱物。根據需要，將適量的細胞懸浮液加入新的培養容器中。
- 在建議的條件下培養細胞。
細胞冷凍保存 (Cryopreservation)
使用細胞冷凍液 (TM024)，或含 10% DMSO 的完全培養基
細胞接種密度
20,000 cells/cm²
稀釋比例 (Split ratio)
1:2 至 1:3
細胞倍增時間
54 小時
細胞永生化方法
利用攜帶有第 16 型人類乳突病毒 E6/E7 基因的逆轉錄病毒進行連續傳代與轉導
表現
- CX43、ZO-1 和 9.3E
- 新黴素抗藥性基因 (Neomycin-resistance)
STR 分析
- D5S818 : 12,13
- D13S317 : 8,11
- D7S820 : 10,12
- D16S539 : 11,12
- VWA : 17,17
- TH01 : 9.3,9.3
- AMEL : X,X
- TPOX : 8,11
- CSF1PO : 10,12
- D12S391 : 17,22
- FGA : 20,23
- D2S1338 : 18,21
- D21S11 : 29,31
- D18S51 : 12,16
- D8S1179 : 13,15
- D3S1358 : 15,15
- D6S1043 : 11,13
- PENTAE : 16,16
- D19S433 : 12,16
- PENTAD : 10,12
- D1S1656 : 12,15