分光光度計的定量原理

分光光度計利用比色原理對樣品進行定量分析。根據「比爾-朗伯定律 (Beer-Lambert Law)」物質在溶液中的濃度與其對特定波長光的吸收強度成正比，並與光通過溶液的路徑長度成正比。在固定路徑長度下，測量溶液對特定波長光的吸收強度可推算出濃度。

吸光度 (A) = 消光係數 (L mol⁻¹ cm⁻¹) × 樣品路徑長度 (cm) × 濃度 (mol/L)

💡 吸光度測量原理快讀

當一束光照向樣品時，一部分的光會被吸收、剩下的光則穿透樣品。我們可以用「透光率（Transmittance，簡寫為 T）」或「透光百分率（%T）」來表示樣品讓多少光通過。T = I / I₀
透光率 T 是通過樣品後的透射光強度 I 與入射光強度 I₀ 的比值

%T = T x 100
透光百分率是透光率乘以 100

為了更清楚表達樣品對特定波長光的吸收能力，通常會將透光率對數轉換為「吸光度（Absorbance，簡寫為 A）」。A = −log₁₀(T) = 2 − log₁₀(%T)
吸光度越高，代表樣品吸收的光越多、透光率越低

吸光度也常被稱為「吸光值」或「光密度 (Optical density, OD)」。在實驗條件控制得當的情況下（如光源穩定、波長正確、樣品均一），吸光度與樣品濃度會呈現良好的線性關係，因此可以用來估算濃度。其計算原理來自比爾-朗伯定律 (Beer-Lambert Law)，常見公式如下：A = εlc
其中： 
　A：吸光度（吸光值、OD）
　ε：摩爾吸收係數（與波長、分子性質相關）
　l：光徑長度（光穿過樣品的路徑長度，通常為比色皿寬度，常見為 1 cm）
　c：樣品濃度（常見單位為 mol/L 或 μg/mL）

分光光度計, 吸收光